花(hua)(hua)生(sheng)(sheng)紅(hong)衣作(zuo)為(wei)(wei)(wei)花(hua)(hua)生(sheng)(sheng)生(sheng)(sheng)產過程中價值極低的(de)副(fu)產物(wu)(wu)(wu)，除(chu)了用(yong)于(yu)動物(wu)(wu)(wu)飼(si)料外，大部分(fen)(fen)被當作(zuo)廢(fei)棄物(wu)(wu)(wu)而(er)造成(cheng)資源浪費。近些年研(yan)究發(fa)現，花(hua)(hua)生(sheng)(sheng)紅(hong)衣中富含(han)多(duo)(duo)酚(fen)類物(wu)(wu)(wu)質，具有(you)很高(gao)的(de)營養和利(li)用(yong)價值。花(hua)(hua)生(sheng)(sheng)紅(hong)衣中多(duo)(duo)酚(fen)類物(wu)(wu)(wu)質含(han)量(liang)為(wei)(wei)(wei)90~125mg/g，包括(kuo)白藜蘆醇(chun)、原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)(qing)(qing)素(su)、酚(fen)酸等(deng)物(wu)(wu)(wu)質，其中原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)(qing)(qing)素(su)占花(hua)(hua)生(sheng)(sheng)紅(hong)衣總質量(liang)的(de)17%，約有(you)50%為(wei)(wei)(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)活性較高(gao)的(de)低聚體。原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)(qing)(qing)素(su)具有(you)較強的(de)抗(kang)氧化(hua)能力，可(ke)作(zuo)為(wei)(wei)(wei)防癌(ai)、防治心血管疾(ji)病藥(yao)物(wu)(wu)(wu)的(de)主要有(you)效成(cheng)分(fen)(fen)，可(ke)用(yong)作(zuo)安全(quan)無毒的(de)新型天然抗(kang)氧化(hua)劑(ji)。目前，市場上原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)(qing)(qing)素(su)產品大部分(fen)(fen)是葡萄(tao)籽(zi)來(lai)(lai)源的(de)原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)(qing)(qing)素(su)，葡萄(tao)籽(zi)中只(zhi)含(han)有(you)B型原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)(qing)(qing)素(su)，其聚合度(du)較高(gao)，平(ping)均聚合度(du)可(ke)達14.3。近年來(lai)(lai)研(yan)究較多(duo)(duo)的(de)花(hua)(hua)生(sheng)(sheng)紅(hong)衣富含(han)A型原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)(qing)(qing)素(su)，聚合度(du)較低，平(ping)均聚合度(du)為(wei)(wei)(wei)3.2。研(yan)究發(fa)現只(zhi)有(you)低聚體原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)(qing)(qing)素(su)(聚合度(du)≤3)可(ke)以(yi)完全(quan)被胃腸道吸收，A型與B型原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)(qing)(qing)素(su)在(zai)人體內發(fa)揮(hui)的(de)作(zuo)用(yong)不(bu)同。鑒于(yu)花(hua)(hua)生(sheng)(sheng)紅(hong)衣與葡萄(tao)籽(zi)來(lai)(lai)源的(de)原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)(qing)(qing)素(su)不(bu)同，有(you)待(dai)于(yu)開發(fa)花(hua)(hua)生(sheng)(sheng)紅(hong)衣來(lai)(lai)源的(de)原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)(qing)(qing)素(su)產品。
不同(tong)純(chun)(chun)度的原(yuan)花(hua)青素在食品(pin)、保健品(pin)、藥品(pin)以及化(hua)妝品(pin)等(deng)領域有一定(ding)的應(ying)用(yong)(yong)，市場對其(qi)(qi)純(chun)(chun)度的需(xu)求也不同(tong)。目前分(fen)離純(chun)(chun)化(hua)方(fang)法主要有溶劑萃取法、層(ceng)析法、液(ye)相制備(bei)色譜等(deng)，但大孔(kong)樹脂法應(ying)用(yong)(yong)最為廣泛，其(qi)(qi)設備(bei)簡單、操作方(fang)便(bian)、便(bian)于工(gong)業(ye)化(hua)生產。本文采(cai)用(yong)(yong)大孔(kong)吸附樹脂對花(hua)生紅衣原(yuan)花(hua)青素進(jin)行分(fen)離純(chun)(chun)化(hua)，并(bing)用(yong)(yong)HPLC-MS對純(chun)(chun)化(hua)產物進(jin)行分(fen)析鑒定(ding)。
花生(sheng)紅(hong)衣原花青素的提取
用(yong)小型(xing)高速粉碎機將花生(sheng)紅衣(yi)粉碎至(zhi)過(guo)40目篩，每千(qian)克花生(sheng)紅衣(yi)采用(yong)10L石油醚去除(chu)脂類物質(zhi)，于(yu)30℃恒溫水浴鍋(guo)中脫(tuo)脂5h，抽濾(lv)(lv)，濾(lv)(lv)渣置(zhi)于(yu)通(tong)風櫥(chu)中去除(chu)石油醚，保(bao)存在干燥器中備(bei)用(yong)。每千(qian)克脫(tuo)脂花生(sheng)紅衣(yi)采用(yong)10L體積(ji)分數為70%的(de)(de)乙(yi)醇溶液提(ti)取(qu)，在超(chao)聲功率120W、超(chao)聲溫度35℃的(de)(de)條(tiao)件(jian)下(xia)，超(chao)聲提(ti)取(qu)10min，相同(tong)條(tiao)件(jian)下(xia)提(ti)取(qu)3次。合并(bing)過(guo)濾(lv)(lv)得到(dao)(dao)的(de)(de)濾(lv)(lv)液，旋轉(zhuan)蒸發至(zhi)干，得到(dao)(dao)花生(sheng)紅衣(yi)原花青素(su)粗(cu)提(ti)物。
大孔吸附(fu)樹脂純化花生紅衣(yi)原花青素(su)
大孔吸附樹脂(zhi)的(de)預處理
大孔吸(xi)附樹脂常(chang)含有(you)(you)(you)一些單體(ti)、分散(san)劑和致孔劑等(deng)，使用時需要(yao)除(chu)去(qu)這些有(you)(you)(you)毒的有(you)(you)(you)機殘留物，所以必須經(jing)過預(yu)(yu)處(chu)理。預(yu)(yu)處(chu)理方(fang)法：無(wu)(wu)水(shui)(shui)乙醇(chun)浸泡(pao)(pao)24h→用無(wu)(wu)水(shui)(shui)乙醇(chun)洗(xi)至流(liu)出(chu)液與(yu)水(shui)(shui)1∶5不渾濁→用去(qu)離(li)子水(shui)(shui)洗(xi)至無(wu)(wu)醇(chun)味→5%HCl溶液浸泡(pao)(pao)2～4h→用去(qu)離(li)子水(shui)(shui)洗(xi)至流(liu)出(chu)液為(wei)中(zhong)性→2%NaOH溶液浸泡(pao)(pao)2～4h→去(qu)離(li)子水(shui)(shui)洗(xi)至流(liu)出(chu)液為(wei)中(zhong)性，備用。
大孔吸附(fu)樹脂的靜態吸附(fu)和解吸試驗(yan)
將經預處(chu)理后(hou)的(de)大(da)孔吸(xi)(xi)附(fu)樹脂(zhi)抽濾(lv)并(bing)吸(xi)(xi)干其表面水分(fen)(fen)，準確稱取4種預處(chu)理后(hou)的(de)樹脂(zhi)1g分(fen)(fen)別置于25mL具塞錐形(xing)瓶中，各加入(ru)10mL(質量濃度(du)為(wei)(wei)5.02mg/mL)花生紅(hong)衣原(yuan)花青(qing)素粗提液(ye)，搖勻，放入(ru)氣(qi)浴恒溫(wen)(wen)振蕩(dang)器(qi)中，振蕩(dang)速率為(wei)(wei)120r/min，溫(wen)(wen)度(du)為(wei)(wei)30℃。在0.5、1、2、3、4、5、6、12、18、24h時吸(xi)(xi)取上清液(ye)，測定上清液(ye)中原(yuan)花青(qing)素的(de)含量，并(bing)以吸(xi)(xi)附(fu)量對時間作圖，得到各樹脂(zhi)的(de)吸(xi)(xi)附(fu)動力學曲線(xian)。過濾(lv)吸(xi)(xi)附(fu)飽和的(de)樹脂(zhi)，分(fen)(fen)別加入(ru)20mL95%乙醇(chun)，在氣(qi)浴恒溫(wen)(wen)振蕩(dang)器(qi)中振蕩(dang)24h，過濾(lv)解(jie)吸(xi)(xi)液(ye)，測定其中原(yuan)花青(qing)素含量。按下(xia)式(shi)計算吸(xi)(xi)附(fu)率、吸(xi)(xi)附(fu)量和解(jie)吸(xi)(xi)率。
(1)吸附(fu)率=(C0-C1)/C0×100%
(2)吸附量=(C0-C1)×V1/m
(3)解(jie)吸(xi)率=C2×V2/(C0-C1)×V1×100%
式中(zhong)：C0為(wei)花(hua)生紅衣原花(hua)青素粗提(ti)液(ye)(ye)質(zhi)量(liang)濃度(du)(du)，mg/mL;C1為(wei)經(jing)樹脂吸(xi)(xi)附后上清液(ye)(ye)中(zhong)原花(hua)青素質(zhi)量(liang)濃度(du)(du)，mg/mL;C2為(wei)原花(hua)青素解(jie)吸(xi)(xi)液(ye)(ye)質(zhi)量(liang)濃度(du)(du)，mg/mL;V1為(wei)經(jing)樹脂吸(xi)(xi)附后上清液(ye)(ye)體積，mL;V2為(wei)原花(hua)青素解(jie)吸(xi)(xi)液(ye)(ye)體積，mL;m為(wei)干樹脂質(zhi)量(liang)，g。
大孔樹脂(zhi)AB-8純化花生紅衣(yi)原花青素(su)
稱取已處理的(de)(de)(de)AB-8大孔吸附(fu)樹脂裝填入層析(xi)柱(zhu)，將一(yi)定質(zhi)(zhi)量(liang)濃(nong)度(du)的(de)(de)(de)花生紅衣原花青素(su)粗提液(以澄清為好(hao))上(shang)柱(zhu)，柱(zhu)溫為室溫;洗(xi)脫(tuo)時首先用4BV蒸餾水(shui)洗(xi)去相對分子質(zhi)(zhi)量(liang)較大的(de)(de)(de)蛋白質(zhi)(zhi)、多糖(tang)等雜質(zhi)(zhi);然后(hou)用4BV不同(tong)體積分數的(de)(de)(de)乙醇溶液將吸附(fu)在樹脂上(shang)的(de)(de)(de)原花青素(su)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)下來，分批收(shou)集流(liu)出液，旋轉蒸發至干，得到原花青素(su)純化物(wu)。接(jie)下式計算(suan)產物(wu)原花青素(su)的(de)(de)(de)純度(du)和回收(shou)率。
(4)純度=純化(hua)物中原花青素(su)質(zhi)量(liang)(liang)/純化(hua)物質(zhi)量(liang)(liang)×100%
(5)回收(shou)率(lv)=洗脫液體積×洗脫液中(zhong)原(yuan)花青(qing)素(su)質量濃度/(上樣(yang)(yang)液體積×上樣(yang)(yang)液中(zhong)原(yuan)花青(qing)素(su)質量濃度)×100%
原花(hua)青素的(de)測定
原花青素標準曲線的繪制
準(zhun)確稱取0.0500g原花(hua)青素(su)標(biao)(biao)準(zhun)品，加甲醇(chun)溶(rong)(rong)解并定容(rong)至(zhi)25mL，得到2.0mg/mL的原花(hua)青素(su)標(biao)(biao)準(zhun)溶(rong)(rong)液(ye)(ye)(現(xian)配)。分(fen)(fen)別(bie)精確量(liang)取0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0mL原花(hua)青素(su)標(biao)(biao)準(zhun)溶(rong)(rong)液(ye)(ye)于10mL棕色(se)容(rong)量(liang)瓶(ping)中，用甲醇(chun)稀釋至(zhi)刻度線，此時得到質量(liang)濃度分(fen)(fen)別(bie)為(wei)0、0.10、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mg/mL的工(gong)(gong)作溶(rong)(rong)液(ye)(ye)。再各取1mL工(gong)(gong)作溶(rong)(rong)液(ye)(ye)于10mL試(shi)管中，分(fen)(fen)別(bie)加入6mL0.04g/mL香草醛甲醇(chun)溶(rong)(rong)液(ye)(ye)，3mL濃鹽酸，搖勻(yun)，在(zai)(30±1)℃下恒(heng)溫水(shui)浴保持(chi)20min，取出，在(zai)500nm波長下測定其吸光度，繪制標(biao)(biao)準(zhun)曲線。回歸方程為(wei)Y=1.3306X+0.0664，R2=0.9966。
花生(sheng)紅衣原花青素的測定(ding)
取1mL稀釋了(le)一定倍(bei)數的花生紅(hong)衣原花青(qing)(qing)素粗(cu)提液，分(fen)別加入6mL0.04g/mL香草醛(quan)甲醇溶液，3mL濃(nong)鹽酸，搖勻，在(30±1)℃下(xia)恒溫(wen)水浴保(bao)持20min，取出，在500nm波長(chang)下(xia)測定其吸光(guang)度，由標(biao)準(zhun)曲線回歸方程可計算(suan)樣品(pin)中原花青(qing)(qing)素的質量(liang)濃(nong)度。
1.2.4HPLC-MS測定花(hua)(hua)生紅(hong)衣原花(hua)(hua)青素(su)
將洗脫級(ji)分(fen)10mg分(fen)別溶于10mL色譜純(chun)甲醇中，經0.45μm濾膜過濾后進行HPLC-MS分(fen)析。
色譜條件：色譜柱(zhu)為(wei)CSH柱(zhu)(2.1mm×100mm，粒徑(jing)1.9μm);流(liu)動(dong)相(xiang)A為(wei)乙腈，流(liu)動(dong)相(xiang)B為(wei)0.1%甲酸水溶液(ye);柱(zhu)溫(wen)45℃;進樣量(liang)1μL;流(liu)動(dong)相(xiang)洗脫(tuo)條件為(wei)0~0.1min，5%A;0.1~30min，5%~20%A;30~32min，20%~80%A;32~32.5min，80%~5%A;32.5~35min，5%A。
質(zhi)譜條件：ESI電(dian)(dian)離(li)源，負離(li)子(zi)模式(shi);毛細管電(dian)(dian)壓(ya)(ya)3.0kV，錐(zhui)孔電(dian)(dian)壓(ya)(ya)40.0V;離(li)子(zi)源溫度100℃，脫(tuo)溶劑(ji)溫度400℃;錐(zhui)孔氣流速50.0L/h，脫(tuo)溶劑(ji)氣流速700.0L/h;碰撞電(dian)(dian)壓(ya)(ya)6V;相對分子(zi)質(zhi)量掃描范圍(m/z)50~2000。
2結果與討論
2.14種大孔吸附樹脂對花(hua)(hua)生紅衣原花(hua)(hua)青素的靜態吸附率(lv)和解吸率(lv)
大孔吸(xi)附(fu)樹(shu)(shu)(shu)脂是(shi)吸(xi)附(fu)性和(he)(he)分子篩原(yuan)理(li)相結合(he)的分離介質(zhi)，其吸(xi)附(fu)力與吸(xi)附(fu)樹(shu)(shu)(shu)脂和(he)(he)吸(xi)附(fu)質(zhi)之間的范德華力和(he)(he)氫鍵作(zuo)用有關(guan)。本(ben)試驗所用大孔吸(xi)附(fu)樹(shu)(shu)(shu)脂包括極(ji)(ji)(ji)性樹(shu)(shu)(shu)脂(NKA-9)、中(zhong)極(ji)(ji)(ji)性樹(shu)(shu)(shu)脂(HPD750)、弱極(ji)(ji)(ji)性樹(shu)(shu)(shu)脂(AB-8)和(he)(he)非極(ji)(ji)(ji)性樹(shu)(shu)(shu)脂(D101)：
NKA-9和AB-8大孔吸附樹脂對原花青素均有較大的吸附率，D101大孔吸附樹脂的吸附率低于其他大孔吸附樹脂。原花青素分子中含有多個酚羥基，可形成氫鍵，具有一定的親水性和極性，容易被極性、中極性和弱極性樹脂吸附。除此之外，大孔吸附樹脂的吸附能力還與其孔隙結構、比表面積等有關。HPD750比表面積大，孔徑小，不利于原花青素分子通過樹脂的孔徑擴散到其內表面而被吸附。NKA-9表面極性大，對原花青素分子產生強烈吸附，會阻礙原花青素的解吸。大孔吸附樹脂的靜態動力學曲線一般可以分為兩種類型：第1種是快速平衡型，其特征是在吸附的起始階段吸附量迅速增加，很快達到吸附平衡;第2種是慢速平衡型，起始階段吸附量較小，吸附量的上升速度緩慢，吸附平衡時間較長。AB-8、NKA-9、D101樹脂對原花青素的吸附屬于快速平衡型，而HPD750則屬于慢速平衡型。因此，綜合考慮樹脂吸附量、解吸率以及靜態吸附動力學特征發現，AB-8大孔樹脂吸附量大、解吸容易并可以較快達到吸附平衡，故選用AB-8大孔吸附樹脂作為分離純化花生紅衣原花青素的吸附材料。
上樣流速對(dui)AB-8大孔吸附(fu)樹脂吸附(fu)原花青素(su)的影響
上(shang)樣(yang)(yang)流速(su)小，樣(yang)(yang)液(ye)中溶質(zhi)與樹(shu)(shu)脂(zhi)接觸時間長，其吸附(fu)(fu)較為完全;流速(su)過大(da)，溶質(zhi)分(fen)子來(lai)不及(ji)擴散(san)到樹(shu)(shu)脂(zhi)的內(nei)表面(mian)進行吸附(fu)(fu)，導致吸附(fu)(fu)不充分(fen)，且浪費了(le)樣(yang)(yang)品。因此，本試驗研究上(shang)樣(yang)(yang)流速(su)對AB-8大(da)孔吸附(fu)(fu)樹(shu)(shu)脂(zhi)吸附(fu)(fu)原花青素(su)的影響：
上樣流速為0.25mL/min和0.5mL/min時，大孔樹脂對原花青素的吸附率比較高，泄漏時間分別出現在250min和180min。當上樣流速為0.75mL/min和1.0mL/min時，泄漏時間出現較早，吸附過程不完全。考慮到實際的生產情況，選取0.5mL/min上樣流速較為合適。
洗脫(tuo)流速對(dui)原花青素(su)洗脫(tuo)效果的影響
為了使洗(xi)脫(tuo)液與AB-8大(da)孔吸附樹脂(zhi)所吸附的(de)溶質有充分的(de)接觸時間，進行(xing)有效地解吸，必須使洗(xi)脫(tuo)液以合適的(de)流速進行(xing)洗(xi)脫(tuo)，因此考察了洗(xi)脫(tuo)流速對(dui)原花青素洗(xi)脫(tuo)效果的(de)影響：
洗脫流速為0.5mL/min和1.0mL/min時，洗脫效果相差不大，而當洗脫流速達到2.0mL/min以上時，洗脫效果明顯變差，原花青素純度也呈下降趨勢。因此，選擇洗脫流速為1.0mL/min，此時原花青素的解吸率為89.31%，純度為98.7%。
不同體積分數乙醇(chun)對原(yuan)花青素的洗脫(tuo)效果
大(da)孔吸附樹脂進(jin)行分(fen)離純化時(shi)常用的洗(xi)脫劑(ji)為(wei)乙醇溶(rong)液(ye)，不同體積分(fen)數(shu)乙醇溶(rong)液(ye)的極性(xing)不同，其對(dui)原花青素的洗(xi)脫能力也有所差異(yi)，因此本試(shi)驗研(yan)究了不同體積分(fen)數(shu)乙醇溶(rong)液(ye)對(dui)原花青素的洗(xi)脫效(xiao)果的影響：
乙(yi)(yi)(yi)醇體(ti)積分數對花(hua)(hua)(hua)(hua)生紅衣原花(hua)(hua)(hua)(hua)青(qing)(qing)素的(de)洗脫(tuo)曲線(xian)有很大的(de)影響(xiang)，其中40%乙(yi)(yi)(yi)醇溶(rong)液(ye)(ye)(ye)的(de)洗脫(tuo)曲線(xian)峰值最高，在0.8～2.5BV范(fan)圍內(nei)收(shou)集(ji)到(dao)的(de)原花(hua)(hua)(hua)(hua)青(qing)(qing)素質量濃(nong)度相(xiang)對較(jiao)高。20%乙(yi)(yi)(yi)醇溶(rong)液(ye)(ye)(ye)對原花(hua)(hua)(hua)(hua)青(qing)(qing)素的(de)洗脫(tuo)效果較(jiao)好，洗脫(tuo)曲線(xian)有明顯(xian)的(de)峰值，稍有拖尾現(xian)象。10%和95%乙(yi)(yi)(yi)醇溶(rong)液(ye)(ye)(ye)對原花(hua)(hua)(hua)(hua)青(qing)(qing)素洗脫(tuo)能力差，洗脫(tuo)曲線(xian)無明顯(xian)峰值。因此，可以通過收(shou)集(ji)不同(tong)范(fan)圍內(nei)的(de)洗脫(tuo)液(ye)(ye)(ye)來制備(bei)不同(tong)純度的(de)原花(hua)(hua)(hua)(hua)青(qing)(qing)素。
洗脫方式或收集方式對原花青素解吸效果的影響
原(yuan)花青(qing)素(su)是由不(bu)同(tong)(tong)聚(ju)合度的(de)(de)兒茶素(su)或(huo)表兒茶素(su)組(zu)成的(de)(de)混合物(wu)，含有(you)大(da)量的(de)(de)酚羥基，樹脂吸(xi)附過程中極有(you)可能發(fa)生氫鍵(jian)吸(xi)附，則不(bu)同(tong)(tong)聚(ju)合度的(de)(de)原(yuan)花青(qing)素(su)被吸(xi)附和解(jie)吸(xi)的(de)(de)過程和速度必然存(cun)在差異。因此，梯度洗(xi)脫極有(you)可能獲得(de)聚(ju)合度不(bu)同(tong)(tong)或(huo)純度不(bu)同(tong)(tong)的(de)(de)原(yuan)花青(qing)素(su)。列出不(bu)同(tong)(tong)體積(ji)分數乙(yi)醇洗(xi)脫收(shou)集到4種原(yuan)花青(qing)素(su)的(de)(de)解(jie)吸(xi)效果：
采用20%乙醇溶液進行洗脫得到的原花青素的純度最高，采用40%乙醇溶液進行洗脫，原花青素的回收率******。因此，選擇20%和40%乙醇作為制備原花青素的洗脫劑。
另將(jiang)20%和(he)40%乙醇(chun)的洗脫(tuo)液分(fen)別收集：
20%乙醇洗脫解吸得到的干重從多到少，純度從低到高再到低，在約2～3.5BV收集到的洗脫液中原花青素純度最高，占總干重的23.4%;40%乙醇洗脫解吸得到的干重從多到少，純度從高到低，在約0~2BV收集到的洗脫液中原花青素純度最高，占總干重的84.2%。
在工業生產中(zhong)可根(gen)據產品要求選(xuan)擇(ze)不(bu)同的(de)(de)(de)洗(xi)(xi)(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)方(fang)式或收(shou)集(ji)(ji)方(fang)式。當(dang)用20%乙醇進行洗(xi)(xi)(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)時(shi)(shi)，收(shou)集(ji)(ji)2~3.5BV洗(xi)(xi)(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)液(ye)(ye)可得到(dao)純(chun)度(du)大于(yu)(yu)98%的(de)(de)(de)原花青素，收(shou)集(ji)(ji)0~4BV洗(xi)(xi)(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)液(ye)(ye)時(shi)(shi)可得到(dao)純(chun)度(du)大于(yu)(yu)95%的(de)(de)(de)原花青素;當(dang)用40%乙醇洗(xi)(xi)(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)時(shi)(shi)，收(shou)集(ji)(ji)0~2BV洗(xi)(xi)(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)液(ye)(ye)可得到(dao)純(chun)度(du)85%~90%的(de)(de)(de)原花青素，收(shou)集(ji)(ji)0~4BV洗(xi)(xi)(xi)(xi)脫(tuo)(tuo)液(ye)(ye)可得到(dao)純(chun)度(du)約為(wei)80%的(de)(de)(de)原花青素。
6HPLC-MS對花生紅衣原花青素純化(hua)物的(de)分(fen)析結果
經AB-8大孔吸附樹(shu)脂分(fen)(fen)離得到的(de)(de)純化(hua)物(wu)均為低(di)聚(ju)體(ti)(ti)(ti)原(yuan)花(hua)青(qing)(qing)素(su)(su)，20%乙(yi)醇(chun)純化(hua)物(wu)的(de)(de)主要(yao)成分(fen)(fen)為A型原(yuan)花(hua)青(qing)(qing)素(su)(su)二聚(ju)體(ti)(ti)(ti)和(he)A型原(yuan)花(hua)青(qing)(qing)素(su)(su)三聚(ju)體(ti)(ti)(ti)，40%乙(yi)醇(chun)純化(hua)物(wu)的(de)(de)主要(yao)成分(fen)(fen)為A型原(yuan)花(hua)青(qing)(qing)素(su)(su)二聚(ju)體(ti)(ti)(ti)和(he)A型原(yuan)花(hua)青(qing)(qing)素(su)(su)四聚(ju)體(ti)(ti)(ti)。研究(jiu)發現只有低(di)相對分(fen)(fen)子質量低(di)聚(ju)體(ti)(ti)(ti)(聚(ju)合度≤3)可以完全被(bei)胃腸道吸收(shou)。因(yin)此，試驗所制備(bei)的(de)(de)花(hua)生紅衣原(yuan)花(hua)青(qing)(qing)素(su)(su)因(yin)其相對分(fen)(fen)子質量小，易于(yu)被(bei)人體(ti)(ti)(ti)吸收(shou)，在人體(ti)(ti)(ti)內(nei)可充分(fen)(fen)發揮其生理功能(neng)。
3結論
研究(jiu)了(le)AB-8大孔吸附樹脂分離(li)純(chun)(chun)化(hua)(hua)得(de)到不(bu)同純(chun)(chun)度花生(sheng)紅衣原(yuan)花青素的(de)(de)制備工藝。******分離(li)純(chun)(chun)化(hua)(hua)條(tiao)件為(wei)：上樣(yang)流(liu)速(su)0.5mL/min，洗脫流(liu)速(su)1.0mL/min，洗脫液20%和(he)40%乙醇(chun)溶液。解吸后(hou)得(de)到20%乙醇(chun)純(chun)(chun)化(hua)(hua)物(wu)和(he)40%乙醇(chun)純(chun)(chun)化(hua)(hua)物(wu)，20%乙醇(chun)純(chun)(chun)化(hua)(hua)物(wu)純(chun)(chun)度最高，可達98.7%，回收率(lv)(lv)較低，為(wei)29.41%，40%乙醇(chun)純(chun)(chun)化(hua)(hua)物(wu)純(chun)(chun)度為(wei)86.2%，回收率(lv)(lv)較高，為(wei)5031%。通過不(bu)同的(de)(de)收集(ji)方式(shi)可得(de)到不(bu)同純(chun)(chun)度的(de)(de)原(yuan)花青素，因此(ci)在(zai)工業生(sheng)產(chan)中可根(gen)據產(chan)品要求選(xuan)擇(ze)不(bu)同的(de)(de)洗脫方式(shi)或收集(ji)方式(shi)。
由HPLC-MS分(fen)(fen)析(xi)可知，經AB-8大孔樹脂(zhi)分(fen)(fen)離得到的純(chun)化(hua)物(wu)均為低(di)聚體(ti)原(yuan)(yuan)花(hua)青(qing)素，20%乙醇純(chun)化(hua)物(wu)的主(zhu)要成(cheng)分(fen)(fen)為A型原(yuan)(yuan)花(hua)青(qing)素二聚體(ti)和(he)A型原(yuan)(yuan)花(hua)青(qing)素三聚體(ti)，40%乙醇純(chun)化(hua)物(wu)的主(zhu)要成(cheng)分(fen)(fen)為A型原(yuan)(yuan)花(hua)青(qing)素二聚體(ti)和(he)A型原(yuan)(yuan)花(hua)青(qing)素四(si)聚體(ti)。